Иерсинии свойства. Иерсинии энтероколита и кишечный иерсиниоз

5. Иерсинии

Род Yersinia содержит семь видов, из которых патогенными для человека являются Y. pestis (возбудитель чумы), Y. pseudotuberculesis (возбудитель псевдотуберкулеза), Y. enterocolitica – возбудитель острых кишечных инфекций, кишечного иерсиниоза.

Y. enterocolitica – это грамотрицательные подвижные палочки, не образующие спор и капсул. Культивируются на простых питательных средах при температуре 20–26 °C.

Биохимические свойства:

1) ферментируют сорбозу, инозит с образованием кислоты;

2) образуют уреазу.

По специфичности О-антигены делятся на 30 сероваров. Чаще всего заболевание вызывают серовары О3 и О9.

Иерсинии устойчивы и способны к размножению во внешней среде, выдерживают низкие температуры. Способны размножаться в молоке, овощах, фруктах, мороженом при низкой температуре. В открытых водоемах они выживают и размножаются.

Иерсиниозы – зооантропонозные заболевания. Резервуар – различные грызуны, которые выделяют бактерии с фекалиями и мочой. Путь заражения алиментарный. Заболевания регистрируются в виде вспышек или спорадических случаев.

Заражение может реализоваться по-разному: от бессимптомного носительства и легких форм до тяжелых и генерализованных, септических (чаще у пожилых, страдающих хроническими заболеваниями).

В патогенезе различают четыре фазы.

1. Внедрение. Иерсинии обладают тропизмом к эпителиальным клеткам тонкого кишечника, проникают в лимфатический аппарат.

2. Энтеральная. Размножение сопровождается гибелью микроорганизмов, выделением эндотоксина. Клинически выражается явлениями энтероколита и лимфаденита. На этой стадии процесс может заканчиваться, тогда развивается типичная кишечная инфекция. Если происходит прорыв лимфатического барьера, то следует третья фаза.

3. Бактериемия: развиваются сепсис и скарлатиноподобная лихорадка.

4. Вторичноочаговые и аллергические проявления. Регистрируются гепатиты, артриты, крапивница. Могут быть поражения любых органов.

Род Yersinia относится к семейству энтеробактерий, включает несколько видов: Yersinia pestis - возбудитель чумы; Yersinia pseudotuberculosis - возбудитель псевдотуберкулеза, Yersinia enterocolitica и др.

Yersinia enterocolitica широко распространены в природе. Обычно они обитают в организме грызунов, часто встречаются у домашних животных.

Морфология . Мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. Средний размер 0,8-1,2 × 0,3-0,7 мкм, но в старых культурах могут быть длиннее и иметь вид нитей. Подвижны. Спор не образуют.

Культивирование . Факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых питательных средах. Наиболее благоприятна для роста температура 22-28° С.

На МПА образуют мелкие блестящие бесцветные колонии (росинки), увеличивающиеся при удлинении сроков выращивания (при 22-25° С). При культивировании при 37° С колонии непрозрачны, имеют неровный фестончатый край и выпуклый центр.

Могут расти при высоком содержании натрия хлорида в среде (до 4%).

Ферментативные свойства . Расщепляют глюкозу без образования газа, не ферментируют сахарозу. Сероводород не образуют, образование индола непостоянно.

Токсинообразование . Содержат эндотоксин. Некоторые штаммы продуцируют экзотоксин.

Антигенная структура . Y. enterocolitica имеют О-, К- и Н-антигены. О-соматический антиген является липополисахаридом. Возбудители заболеваний человека чаще всего принадлежат к сероварам О9, О3, О5.

Устойчивость к факторам окружающей среды . К воздействию высокой температуры неустойчивы. При 100° С погибают мгновенно, при нагревании до 60-80° С - через 15-20 мин. Хорошо сохраняются при низкой температуре (-15 -20° С), при 4-14° С не только сохраняются, но и размножаются. Прямой солнечный свет убивает их в течение 30 мин, рассеянный - через 6-8 ч. Быстро погибают при высыхании. В пищевых продуктах могут длительно сохраняться и даже размножаться.

Растворы дезинфицирующих веществ (сулема, хлорамин, фенол) убивают иерсинии за несколько минут.

Восприимчивость животных . Лабораторные животные практически не чувствительны к Y. enterocolitica. В естественных условиях они могут вызвать тяжелые заболевания грызунов, свиней, кошек, собак, часто со смертельным исходом.

Источники инфекции . Чаще больные животные, реже человек.

Пути передачи . Пищевой.

Патогенез . Попадая через рот в желудочно-кишечный тракт, иерсинии размножаются. Иногда они проникают в эпителиальные клетки кишечника и размножаются внутри них. Эндотоксин и токсические вещества, вырабатываемые иерсиниями, вызывают явления острого гастроэнтероколита. При проникновении возбудителей в кровь развиваются бактериемия и генерализованный процесс, при котором поражаются разные органы: печень, селезенка и др.

Профилактика . Санитарный контроль за хранением и обработкой пищевых продуктов. Соблюдение санитарно-гигиенического режима на предприятиях общественного питания и правил личной гигиены.

Специфическая профилактика отсутствует.

Лечение . Антибиотики и симптоматическое лечение.

Микробиологическое исследование

Цель исследования: выделение и идентификация иерсинии из патологического материала.

Материал для исследования

1. Испражнения.

2. Рвотные массы и промывные воды желудка.

5. Слизь из зева и носа, отделяемое раны.

6. Секционный материал.

Основной метод исследования

Микробиологический

Ход исследования

Второй день исследования

Просматривают посевы на среде Эндо, ЭМС. Выбирают мелкие круглые блестящие колонии. Выделяют на комбинированную среду Рассела или Олькеницкого. Чашки оставляют при 20-28° С. Делают высев со среды обогащения на среды Эндо или ЭМС.

Третий день исследования

Повторно просматривают чашки с посевами. Выбирают более крупные колонии (0,1-0,2 мм), круглые с ровным краем, блестящие с розоватым оттенком. Выделяют на среду Рассела или Олькеницкого. Просматривают чашки с посевами со среды обогащения, выбирают вышеописанные колонии и выделяют их на среду Рассела или Олькеницкого.

Просматривают посевы на среде Рассела и Олькеницкого. Делают мазки и окрашивают их по Граму. При наличии мелких грамотрицательных палочек (иногда полиморфных), не ферментирующих лактозу, ферментирующих глюкозу и мочевину, не образующих сероводород, делают пересев для определения подвижности (при 18-20° С и 37° С) и в среды Гисса (маннит, мальтоза, сахароза, рамноза, желатин, цитрат).

Четвертый день исследования

Повторяют просмотр чашек и комбинированных сред. Учитывают результаты роста на средах Гисса, агаре для определения подвижности, желатине.

При выделении грамотрицательных палочек, не расщепляющих лактозу, рамнозу, не образующих сероводорода, ферментирующих глюкозу, маннит, сахарозу, подвижных при 22° С и неподвижных при 37° С, дают ответ: "Выделены иерсинии энтероколитика".

Контрольные вопросы

1. Каковы особенности иерсинии энтероколитика?

Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез - острые инфекционные заболевания, протекающие с преимущественным

поражением желудочно-кишечного тракта. Возбудители принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, рода Yersinia (Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica).

Микробиологической диагностики этих заболеваний используют микроскопический, бактериологический, серологический и аллергологический методы.

Материалом для исследования кровь, моча, стул, продукты питания.

Микроскопический метод. В мазках, изготовленных из испражнений, мочи и крашеных по Граму Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica имеют вид безспорових грамотрицательных палочек размером от 1-3 - 0,5-0,8 мкм. Оба вида бактерий подвижные при температуре 18-20ºС и неподвижные при температуре 37 ° С.

Бактериологический метод. Основан на выделении возбудителя, как правило, с каловых масс больного. Сначала материал для исследования высевают в жидкие среды накопления (фосфатно-буферный раствор, 1% пептонная вода) и выдерживают в холодильнике при температуре 5-6 ° С для накопления иерсиний в микробных ассоциациях. При недостаточности питания и низкой температуре иерсинии накапливаются быстрее других энтеробактерии. На 3-5 сутки выполняют висел из среды накопления на чашки Петри со средами Эндо, Плоскирева, Серова, предварительно обработанные слабым раствором щелочи, и помещают в термостат для культивирования.

Y. enterocolitica на плотных средах образует мелкие, круглые, выпуклые блестящие колонии с ровными краями, с блакитино-серым оттенком. В процессе старения колонии сливаются и растут сплошь. На среде Эндо образуются колонии с розовым оттенком. В редких питательных средах наблюдают диффузный рост в виде помутнения.

Y. pseudotuberculosis образуют как S- так и R-формы колоний. S-формы Y. pseudotuberculosis - мелкие, блестящие, серовато-желтые и менее прозрачные чем в Y. enterocolitica. На среде Эндо колонии бесцветные. R-формы - выпуклые, бугристые, средних размеров, часто с фестончатыми краями. В процессе старения колонии увеличиваются в размерах и теряют свою прозрачность. В жидкостных питательных средах иерсинии дают диффузный рост в виде помутнения или в виде осадка хлопьев, оставляя среду прозрачным. Отбирают подозрительные колонии, выросшие и изготавливают из них мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют. Часть колонии, которая остались, пересевают на скошенный питательную среду для накопления чистой культуры микробов. Пробирки помещают в термостат на 48-72 часов при температуре 22-30 ° С.

Полученную чистую культуру микроорганизмов высевают в пестрый ряд Гиса для изучения биохимических свойств.

Иерсинии не образуют сероводорода, проявляют уреазная активность. Ферментируют большинство углеводов, исключая лактозу и мычать, без образования газа. В иерсиний псевдотуберкулеза реакция Фогеса-Проскауера всегда отрицательная, тогда как в кишечных иерсиний при температуре 22-28 ° C она положительная. Псевдотуберкульозни микробы от кишечных иерсиний отличаются по отношению к сахарозы и рамнозы, лизабельнистю псевдотуберкульозним бактериофагом и аглютинабельнистю соответствующими видовыми сыворотками.

Для изучения антигенных свойств выполняют реакцию агглютинации на стекле с адсорбированной диагностической сывороткой при разведении 1:10. Результаты оценивают через 3-5 минут.

Серологический метод. С целью выявления специфических антител в крови больного используют реакцию агглютинации и реакцию пассивной гемагглютинации (см. Приложение). Исследуют парные сыворотки, отобранные в начале и на 3-й неделе заболевания. Развернутая РА типа Видаля выполняется с соответствующими диагностикумами. Реакцию считают положительной при титре антител 1: 200 и выше. Реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) ставят с эритроцитарных псевдотуберкульозним и кишковоиерсиниозним диагностикумами. РПГА считается положительной при титре 1: 160 - 1: 200 и выше.

При исследовании парных сывороток, наиболее вероятным считают прирост титров антител в 4 раза и больше.

В экспресс-диагностике псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза для выявления антигенов иерсиний в материале, который исследуется, в первые дни заболевания может быть использован ИФА (см. Приложение).

Аллергологический метод. Для постановки внутрикожной пробы * используют алергодиагностични препараты "псевдотуберкулин" и "ентероиерсин". Учет пробы проводят через 24 часа. Реакция считается положительной, если в месте введения 0,1 мл аллергена образуется папула и зона гиперемии диаметром 10 мм и более.

1. Классификация: ФАН палочки, с. Enterobacteriaceae, р. Yersinia, в. Y. enterocolitica.
2. Морфология: Гр-, палочки, имеет перитрихии и пили, микрокапсулу, споронеобразующие, подвижны, окрашиваются биполярно
3. Тип питания: хемоорганотрофы
4. Биологические свойства: а) хорошо растут на простых питательных средах б) ферментируют гл, сахарозу, проявляют пектиназную активность
5. АГ структура: О-АГ, Н-АГ.
6. Факторы патогенности и патогенез:

А) адгезины (пили – соединяются с фибронектином, белки наружной мембраны)

Б) инвазины – облегчают взаимодействие с кишечным эпителием

В) фосфатаза и протеинкиназа – нарушают функцию макрофагов

Г) энтеротоксин и эндотоксин (ЛПС)

Проникновение в слизистую дистального отделе тонкой кишки → размножение в пейеровых бляшках → проникновение в брыжеечные л. у. (мезентериальный лимфаденит) → бактериемия (генерализация инфекции) → проникновение в органы и ткани (печень, селезенка, лимфатические узлы). В случае незавершенного фагоцитоза возможна длительная персистенция МБ. Вследствие этого может развиться вторично-очаговая форма с поражением любого органа (сердца, печени, суставов, легких) либо возникновение обострений и рецидивов. Большое значение имеют аллергический компонент и аутоиммунные процессы.

1. Клинические проявления:
2. Инкубационный период около 3 дней. Заболевание начинается остро. Симптомы общей интоксикации. Температура тела субфебрильная. Часто на первый план выступают признаки поражения желудочно-кишечного тракта (боли в животе, тошнота, рвота, понос). На коже иногда появляется сыпь. Проявляются симптомы вторичного поражения органов.
3. Иммунитет: изучен недостаточно, вначале заболевания преобладает ГИО.
4. Эпидемиология. Источник – больные люди и животные, носители. ОПЗ – алиментарно. Устойчивы к низкой температуре (размножаются даже в холодильнике). Погибают при высыхании, воздействии солнечного света и различных химических веществ (хлорамина, спирта), при кипячении.
5. Профилактика: специфическая не разработана.
6. Лечение: АБ широкого спектра действия.
7. Диагностика:

Метод: бактериологический.

Материал для исследования: при кишечной форме возбудитель выделяют из испражнений; при аппендикулярной – из мезентериальных лимфатических узлов и крови; при септической – из испражнений и крови.

1-й этап: материал засевают петлей или тампоном на одну из плотных элективных сред (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитагар). Посевы инкубируют в течение 24 часов при 37°С, а затем дополнительно 24 часа при 20-22°С.

Одновременно испражнения засевают в одну из сред накопления (МПБ или пептоннуюводу). Кровь засевают в соотношении 1:10 только в среды накопления. Посевы помещают при 4-5°С и выдерживают до 30 суток, периодически высевая через каждые 3-5 дней на плотные элективные среды. Y. enterocolitica при низкой температуре размножаются в этих средах, в то время как сальмонеллы, шигеллы, кишечная палочка, протей не размножаются.

2-й этап: просматривают посевы на плотных средах и отбирают подозрительные колонии (округлые, сероватого цвета на Эндо и Плоскирева и коричневого на висмут-сульфитагаре), Из колоний делают мазки по Граму и при наличии грам/- палочек отсевают на среду Ресселя.

3-й этап: при изменении цвета столбика на среде Ресселя из роста на ней делают мазок по Граму на чистоту культуры и изучают следующие тесты:

4-й этап: учет результатов и выдача окончательного ответа. При серологическом методе исследования кровь берут в конце первой и начале третьей недели. Ставят развернутую реакцию агглютинации с аутоштаммами и парными сыворотками больного. При положительном результате отмечается значительное нарастание титра антител.