Метод толстого мазка под целлофаном. Анализ на энтеробиоз

Испражнения исследуются двумя методами:

1. Макроскопический – обнаруживают гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы. Небольшие порции кала, перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Все подозрительные образования пинцетом переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина.

При методе отстаивания исследуемую порцию фекалий размешивают с водой в стеклянном цилиндре, после отстаивания сливают верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают в чашке Петри.

2. Микроскопический – для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Существует много методов исследования.

Нативный мазок – наиболее распространенный и технически доступный метод исследования. Можно обнаружить яйца и личинки всех гельминтов. Однако, при небольшом количестве яиц их не всегда удается найти. Поэтому используется метод обогащения.

1. Метод Фюллеборга – это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 – плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40% раствор NaCl). Метод более эффективен, чем нативный мазок. В стеклянные банки помещают 2-5 г фекалий и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом. Недостаток метода – замедленное высплывание яиц различных гельминтов, карликовый цепень – через15-20 минут, аскарид – 1,5 часа, власоглав – 2-3 часа.

2. Метод Калантарян – также метод обогащения, но применяется насыщенный раствор NaNO 3 (1,38 плотность). Большинство яиц всплывает, не требуется исследования осадка. Недостаток – длительное выдерживание яиц в растворе, приводит к тому, что некоторые яйца начинают набухать и оседать на дно, исчезая с поверхностной пленки.

3. Метод Горячева – основан на принципе осаждения яиц, обнаружения мелких яиц трематод. В качестве раствора используют насыщенный раствор NaCl и сверху осторожно наслаивают 3-4 мл раствора фекалий. Через 15-20 часов яйца трематод оседают на дно. Жидкость сливают, осадок на предметное стекло и под микроскоп.

4. Метод закручивания по Шульману – для обнаружения в кале личинок гельминтов. Исследуют только свежевыделенные фекалии. 2-3 г помещают в стеклянную банку и приливают 5-кратное количество воды, быстро размешивают палочкой, не касаясь стенок банки – 20-30 минут, затем палочку быстро вынимают, и каплю жидкости на конце переносят на предметное стекло и микроскопируют.

5. Метод Бермана – основан на способности, личинок гельминтов мигрировать, по направлению к теплу, и служит для выявления их в фекалиях.

6. Метод Харада и Мори (метод выращивания личинок) и рекомендуется для исследования на анкилостомитозы. Метод основан на том, что в тепле и на влажной фильтрованной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить. На середину полоски фильтрованной бумаги наносят 15 г кала, бумагу с фекалиями помещают в банку, так, чтобы нижний конец был погружен в воду, а верхний закреплен пробкой. Банку выдерживают в термостате 28 0 С в течение 5-6 дней. Филяриевидные личинки развиваются за это время и спускаются в воду. Жидкость исследуют под лупой. Если трудно обнаружить, жидкость центрифугируют, убив предварительно личинок нагреванием до 60 0 . Лаборант должен работать в перчатках.

7. Методы на энтеробиоз – выявление яиц острицы и бычьего цепня.

а) соскоб с перианальных складок – ватным тампоном, туго намотанным на деревянную палочку и смоченную 50% раствором глицерина. В лаборатории тампон смывают 1-2 каплями 50% водным раствором глицерина.

б) метод липкой лепты (метод Грэхэма)

Липкую ленту прикладывают к перианальным складкам, затем липким слоем к предметному стеклу и микроскопируют.

в) соскоб с помощью глазных палочек (метод Рабиновича). Для перианального соскоба используют стеклянные глазные палочки, широкая часть которых покрывается специальным клеем, что позволяет удерживать яйца остриц.

Исследование крови, желчи, мокроты и мышц

Микроскопия крови – обнаруживают личинки филярий.

Исследование мокроты – яйца параганима, личинки аскариды, некатора, стронгилоида, элементы эхинококкового пузыря.

Исследование мышц – при подозрении на трихинеллез исследуют мышцы больного или трупа, а также мясо, предположительно послужившего причиной заражения человека. С целью трихинеллоскопии мышцу разрезают на мелкие кусочки и помещают в компрессорий, это два широких, толстых стекла, которые раздавливают мышцы и личинки трихинеллы обнаруживаются в виде капсул – метод компрессии.

Метод переваривания – мышцы заливают искусственным желудочным соком (раствор соляной кислоты и пепсин). Мышцы перевариваются, а личинки легко выявляются. Определение интенсивности инвазии: количество личинок до 200 на 1 г мышечной ткани – умеренная интенсивность инвазии; до 500 – интенсивная; свыше 500 – сверхинтенсивная инвазия.

Серологические методы

Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте, носовой и влагалищной слизи, содержимом подногтевых пространств, биопсированных кусочках ткани.

При диагностике нельзя каким-либо одним методом выявить яйца или личинки всех видов гельминтов, обитающих в пищеварительной системе человека. Так, при использовании метода флотации в поверхностную пленку не всплывают (из-за высокого удельного веса) яйца трематод, в некоторых случаях неоплодотворенные яйца аскарид. В кале очень редко можно обнаружить яйца остриц, онкосферы тениид, которые выявляются специальными методами исследований: соскоб с перианальных складок для остриц и тениид, методы осаждения для трематод (яйца описторха и др.). Поэтому для целенаправленного обследования больного на гельминтозы врач в направлении должен указать, на какие гельминты следует обратить основное внимание (диагноз), что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления данного вида гельминта. Фекалии, взятые из разных мест испражнений в количестве не менее 50 граммов (чайная ложка) в чистую стеклянную посуду, должны быть отправлены в лабораторию не позднее чем через сутки после дефекации и исследованы в день поступления.

В случае необходимости сохранения кала до следующего дня его помещают в холодное место (0-4°С) или заливают одним из консервантов.

Перед исследованием кал перемешивают палочкой, чтобы яйца гельминтов оказались равномерно распределенными в общей массе.

При обнаружении в препарате яиц какого-либо гельминта просмотр не прекращают, т.к. может быть двойная или тройная инвазия.

Контроль за эффективностью лечения гельминтозов осуществляется путем исследования фекалий на яйца гельминтов через 2-3 недели или через 2-3 месяца после лечения в зависимости от обнаруженного гельминта.

Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы.

Часто на поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; выделяются с калом аскариды; иногда люди сами замечают отхождение гельминтов. У больных дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца (в виде "лапши"), а у инвазированных тениидами (свиной или бычий цепень) с калом часто отходят членики гельминтов (в виде "белых обсечек") или они активно выползают из анального отверстия.

Макроскопический метод является основным для дифференциальной диагностики тениидоза и тениаринхоза (в сочетании с опросом).

Из специальных макроскопических методов применяется метод последовательного промывания фекалий.

Фекалии размешиваются в воде для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении их тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы, крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, и рассматривают их под лупой между двумя предметными стеклами. Мелких гельминтов или головки цестод рассматривают под лупой в капле глицерина или под микроскопом.

При использовании этого метода для диагностики члеников свиного, бычьего цепней, широкого лентеца отмытые членики помещают между двумя стеклами и, просматривая на свет под лупой или малым увеличением микроскопа, определяют видовую принадлежность по строению матки (у зрелого членика свиного цепня от центрального ствола отходят 8-12 боковых ответвлений, а у бычьего цепня 18-32, чаще 28-32, у широкого лентеца членики больше в ширину и матка в центре в виде "розетки"). Если матку плохо видно, то ее предварительно можно подержать некоторое время в 50% растворе глицерина, после чего даже запустевшие стволы матки просматриваются хорошо.

При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба.

Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости.

К сложным методам относятся методы обогащения:

а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку);

б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок).

Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др.

Простые методы исследования фекалий

Нативный мазок . Небольшую частицу испражнений берут деревянной палочкой из различных участков доставленной порции, хорошо растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина и делают на 2-3 предметных стеклах тонкий мазок. Просматривают под микроскопом не менее 3 препаратов. Недостаток метода: просматривается малое количество материала, поэтому как самостоятельный метод не применяется.

Метод закручивания (Шульмана). 2,0-3,0 г испражнений кладут в стаканчик, тщательно размешивают стеклянной палочкой с 5-кратным объемом физиологического раствора или дистиллированной воды, производя быстрые движения в течение 2-3 мин, и быстро вынимают палочку из смеси. Каплю смеси на конце палочки переносят на предметное стекло и микроскопируют. Принцип центробежной силы вызывает скопление яиц и личинок на палочке.

Метод толстого мазка по Като с целлофаном . Химические реактивы:100%-ный глицерин, 6%-ный раствор фенола (100 мл воды + 6 г фенола), 3%-ный раствор малахитовой зелени (2,5 мл дистиллированной воды + 75 мл малахитовой зелени).

Приготовление рабочего раствора: 100 мл 6%-ного раствора фенола + 100 мл чистого глицерина + 1,2 мл 3%-ного раствора малахитовой зелени.

Приготовление целлофановых полосок: нарезаются полоски из целлофана, размер которых соответствует предметному стеклу. Целлофан должен быть гидрофильный (пригоден целлофан, который горит; если плавится, то непригоден). В рабочем растворе можно обработать до 5 тыс. полосок. Срок экспозиции целлофановых полосок до готовности к употреблению в рабочем растворе не менее 24 час.

Ход исследования. На предметное стекло наносят 50 мг фекалий (с крупную горошину), растирают индивидуальной палочкой (стеклянной, деревянной), накрывают целлофановой полоской и сверху притирают резиновой пробкой до получения равномерного толстого мазка. Препарат высушивают при комнатной температуре в течение часа или в термостате при 40°С в течение 20-30 мин и микроскопируют (время выдержки можно увеличить при комнатной температуре до 5-6 час и более).

По эффективности данный метод приближается к методу флотации, но выявляет инвазию интенсивную и средней интенсивности.

Применяется как самостоятельный метод диагностики и рекомендуется для массового обследования населения.

В клинико-диагностических лабораториях применяется как унифицированный метод диагностики гельминтов при отсутствии в направлениях врачей конкретных диагнозов.

Методы перианального соскоба и нативного мазка с раствором Люголя описаны в разделе специальных методов.

Сложные методы обогащения фекалий

В основу методов обогащения положена разность удельного веса яиц гельминтов и применяемого солевого раствора.

При применении метода флотации могут быть использованы следующие солевые растворы:

1. Раствор нитрата свинца PbNO3 (азотнокислого свинца) с плотностью 1,5. Готовится из расчета 650 г вещества на 1 л воды. Соль растворяют порциями в горячей воде в эмалированной посуде, подогревая на плите и постоянно помешивая до полного растворения. Фильтровать раствор не обязательно. Раствор готовят в день исследования, так как со временем он дает осадок, и плотность его начинает падать уже через 24 ч. Если раствор приготовлен в большом количестве, то в последующие дни перед исследованием его подогревают, размешивая осадок. Приготовление раствора производится в вытяжном шкафу, так как нитрат свинца – соль тяжелого металла.

2. Раствор нитрата аммония NH4NO3 (гранулированной или обычной аммиачной селитры) с плотностью 1,3 готовят так же, как и предыдущий, но из расчета 1500 г вещества на 1 л горячей воды.

3.Раствор нитрата натрия NaNO3 или азотнокислого натрия с плотностью 1,38-1,4 готовят из расчета 1000 г вещества на 1 литр горячей воды.

4. Раствор тиосульфата натрия Na2S2O3×5H2O (гипосульфита натрия) с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 г вещества на 1 л горячей воды.

5. Раствор сульфата натрия Na2SO4 (английской соли) с плотностью 1,26-1,28 готовят из расчета 920 г вещества на 1 л горячей воды.

6. Раствор хлорида цинка ZnCl2 (хлористого цинка) с плотностью 1,82 готовят из расчета 2000 г вещества на 1 л горячей воды. Остывший раствор не кристаллизуется.

7. Насыщенный раствор хлорида натрия NaCl (поваренная соль) с плотностью 1,18-1,2. На! л воды добавляют 400-420 г соли порциями в эмалированное ведро с кипящей водой, постоянно размешивая до полного растворения. При остывании раствора выпадают кристаллы хлорида натрия.

Удельный вес флотационных растворов измеряется аэрометром только после полного остывания раствора при комнатной температуре.

Методы флотации наиболее эффективны для обнаружения яиц карликового цепня, власоглава, анкилостомид, аскарид, широкого лентеца.

Поверхностную пленку можно снимать с помощью проволочной петли или предметного стекла.

В насыщенном растворе поваренной соли пленку можно исследовать через 30-40 мин, в растворе аммиачной селитры – через 10-20-30 мин после отстаивания.

При снятии пленки проволочной петлей исследуют не менее 8 капель.

Предметные стекла снимают с пленки больше яиц, чем проволочные петли. Стекло должно соприкасаться с жидкостью флотационного раствора, которую добавляют в стаканчик пипеткой. После отстаивания стекло снимают, кладут смоченной поверхностью вверх на стекло большего размера и исследуют под микроскопом. Предметные стекла перед использованием обязательно обезжиривают.

Для проведения исследований необходимо иметь: предметные стекла, химические стаканчики, проволочные петли, кюветы, чашки Петри, пипетки, груши, стеклянные или деревянные палочки.

Ход исследования. 5 г фекалий заливают 10-кратным количеством флотационного раствора (лучше удельным весом 1,38-1,40), тщательно размешивают, снимают сверху не растворяющиеся крупные частицы и оставляют взвесь на 10-15 мин. Затем пленку снимают либо петлей на предметное стекло, либо предметным стеклом. Для разведения испражнений лучше взять стаканчики емкостью 30-50 мл, налить раствор вровень с краями (или недоливать 2-3 мм) и смесь покрыть предметным стеклом, а затем пипеткой добавить флотационный раствор до его соприкосновения с предметным стеклом. Через 10-20 мин стекло быстро снять и оставшуюся на нем пленку микроскопировать без покровного стекла.

Методы осаждения-седиментации

Методы седиментации применяются для выявления в кале яиц геогельминтов, биогельминтов и как специальные методы исследования на описторхоз.

Метод Горячева-Золотухина (упрощенный метод Горячева). Около 1,5 г кала размешивают в химическом стаканчике в 3-4 мл воды. Полученную взвесь фильтруют через два слоя марли в центрифужную пробирку, наслаивая осторожно сверху на имеющиеся в ней 4-5 мл насыщенного раствора поваренной соли. Пробирки ставят в штатив на 15-20 ч. За это время тяжелые яйца трематод оседают. Получают два четко разграниченных слоя. Осадок микроскопируют.

Эфир-формалиновый метод. Применяется для диагностики всех кишечных инвазий и как специальный метод на простейшие и яйца описторхов.

Оборудование: центрифуга на 3000 об/мин; центрифужные градуированные пробирки, воронки; металлическое ситечко (чайное) или двухслойный бинт; предметные и покровные стекла; деревянные (или стеклянные) палочки; вата, бинт.

Химреактивы: 10%-ный раствор формалина (1 часть раствора формалина аптечного и 4 части дистиллированной воды); этиловый эфир (медицинский).

В центрифужные пробирки наливают 7 мл 10%-ного раствора формалина и помещают 1 г фекалий (такое количество фекалий, чтобы раствор в пробирке поднялся до 8 мл). Фекалии смешивают с формалином до образования однородной смеси, а затем через металлическое ситечко (или двухслойную марлю, бинт) переливают в другую центрифужную пробирку (если на ситечке остались фекалии, то ситечко надо ополоснуть формалином). Добавить 2 мл эфира в эту центрифужную пробирку, закрыть пробкой и энергично встряхивать в течение 30 сек.

Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение одной минуты (можно в течение двух минут при 1500 об/мин). За счет реакции эфир-формалина происходит коагуляция белков в виде пробки вверху пробирки, а в осадок выпадают яйца гельминтов. Слой коагулянта убирают, сливается надосадочная жидкость, осадок наносится на предметное стекло прямо из пробирки или пастеровской пипеткой, накрывается покровным стеклом и просматривается под микроскопом.

Метод эфир-уксусного осаждения . Принцип эфир-уксусного осаждения яиц гельминтов заключается в последовательной обработке проб фекалий 10%-ным водным раствором уксусной кислоты и эфиром. Уксусная кислота лучше других химических соединений эмульгирует пробу фекалий. Она проникает в непереваренные частицы, состоящие преимущественно из клетчатки, которые при большом содержании мешают исследованиям, выпадая в осадок после центрифугирования. Последующее добавление в пробирку эфира и перемешивание приводит к извлечению из содержимого пробирки уксусной кислоты вместе с пропитанными ею каловыми частицами. Так как удельный вес смеси эфира с уксусной кислотой меньше удельного веса воды, пробы кала, обработанные этими веществами, всплывают, а яйца гельминтов, обладающие большим удельным весом, оседают.

Количество осадка, полученного после эфир-уксусного осаждения, в 3-4 раза меньше, чем после эфир-формалинового. Это значительно облегчает обнаружение в нем яиц гельминтов и позволяет исследовать осадок целиком при навеске в 0,5-1 г. Токсичность эфир-уксусного метода в 5 раз ниже.

Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 7 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и вносят навеску кала 1 г (т.е. такое количество кала, при котором раствор уксусной кислоты поднимается до 8 мл). Тщательно размешивают стеклянной или деревянной палочкой. Процеживают через воронку с двумя слоями марли в другую центрифужную пробирку. К эмульгату добавляют 2 мл этилового эфира (т.е. до 10 мл). Пробирки закрывают резиновой пробкой (можно от пенициллинового флакона) и встряхивают 15 сек. Убрав пробку, пробирки центрифугируют в течение одной минуты при 3000 об/мин в течение 2 мин. Надосадочную жидкость из пробирки сливают. В некоторых случаях образовавшаяся каловая пробка мешает сливу надосадочной жидкости. В этом случае стеклянной или деревянной палочкой отделяют пробку от стенок пробирки. Осадок пипеткой целиком переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом при малом увеличении. Осадок, как правило, небольшой, бесцветный. Яйца гельминтов, особенно мелкие яйца трематод, хорошо обнаруживаются.

Химико-седиментационный метод . Принцип исследования основывается на осаждении яиц из пробы фекалий в солевом растворе с удельным весом 1,15. Сущность метода заключается в непосредственном центрифугировании пробирки, в которой на раствор азотнокислого натрия (уд. вес 1,16) наслоена пробка кала, эмульгированная в 1%-ном растворе уксусной кислоты. Высокий удельный вес солевого раствора и выделяемые за счет химической реакции пузырьки, пронизывающие слой гомогенизированного кала, препятствуют его осаждению. Яйца гельминтов выпадают в осадок с небольшим количеством клетчатки. Осадок можно очистить от оставшегося детрита, обработав его 10%-ным раствором уксусной кислоты и эфиром. В этом случае остаются только одни яйца гельминтов, что значительно облегчает их выявление.

Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 6 мл раствора азотнокислого натрия с удельным весом 1,15. В другую пробирку наливают 7 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты. Вносят пробу фекалий (до метки 7,5 мл при пробе 0,5 г и до 8 мл при пробе в 1,0 г). Тщательно перемешивают пробу стеклянной палочкой. Процеживают через воронку с одним слоем марли, наслаивая на раствор азотнокислого натрия. Пробирку с наслоенным фильтратом центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 5 мин. Быстрым переворачиванием пробирки сливают надосадочную жидкость. В пробирку с осадком добавляют 3-4 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл эфира, закрывают резиновой пробкой и встряхивают. Проводят повторное центрифугирование в течение 1 мин. Сливают надосадочную жидкость. Осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЖЕЛЧИ, ДУОДЕНАЛЬНОГО СОДЕРЖИМОГО, МОКРОТЫ, КРОВИ, МОЧИ И МЫШЦ

Обнаружение яиц и личинок гельминтов в дуоденальном содержимом и желчи. Исследование желчи и дуоденального содержимого производится при подозрении на гельминтозы печени и желчного пузыря (описторхоз, клонорхоз, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки (стронгилоидоз).

Ход исследования. Дуоденальное содержимое и желчь (порции А, В, С) получают обычным путем при помощи зондирования. Для порции В рекомендуется обязательно получать рефлекс желчного пузыря введением через зонд 33% раствора сернокислой магнезии. Из исследуемой жидкости выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом.

При отсутствии гноя и слизи желчь и дуоденальное содержимое центрифугируют, не смешивая с эфиром.

Исследование мокроты. В гельминтологической практике исследование мокроты проводится с целью лабораторной диагностики парагонимоза. Иногда при этом выявляются яйца шистосом, личинки аскариды, элементы эхинококкового пузыря.

Из мокроты готовят нативный мазок на предметном стекле, который исследуют под микроскопом.

При обильном содержании в мокроте гноя ее смешивают с 0,5% раствором едкого натра или едкого калия, встряхивают в течение 5 минут и центрифугируют. Осадок микроскопируют.

Исследование крови. Кровь исследуют при подозрении на наличие у больного филяриозов.

В связи с тем, что при некоторых видах филяриозов (лоаоз, вухерериоз, вызванный субпериодическим штаммом) личинки (микрофилярии) бывают в периферической крови только днем, а при некоторых (бругиоз, вухерериоз, вызванный периодическим штаммом) – только ночью, соответственно в это время берут кровь для анализа.

Техника забора крови, приготовления препаратов (тонкий мазок и толстая капля), их окрашивания (по Романовскому) и исследование аналогичны таковым при лабораторной диагностике малярии.

Микрофилярии разных видов отличают по длине, ширине, изгибу тела, наличию или отсутствию чехлика, форме хвостового конца, расположению ядерной субстанции в теле и хвостовом отделе личинок.

Ход исследования. Мочу отстаивают не менее 30 мин, затем верхний слой сливают, оставляя 10-15 мл осадка, которые разливают в центрифужные пробирки, и центрифугируют в течение 1-2 мин. Слив надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОПТАТОВ МЫШЦ

Метод трихинеллоскопии . Необходимость в исследовании биоптатов мышц больного возникает при подозрении на трихинеллез.

Биопсия проводится по общим правилам. Обычно делают биопсию дельтовидной мышцы. При паталогоанатомическом исследовании можно делать биопсию мышц диафрагмы, пищевода, языка, жевательных и межреберных мышц, сгибателей конечностей, мышц глазного яблока, так как они наиболее интенсивно поражаются личинками трихинелл.

В лаборатории биопсированный кусочек мышц разрезают на очень мелкие кусочки (микротомом), которые помещают между двумя стеклами, раздавливая мышечные волокна, и исследуют под микроскопом. В настоящее время для этой цели широко используются специальные микроскопы – трихинеллоскопы.

В случае трихинеллеза при трихинеллоскопии по ходу мышечных волокон обнаруживаются резко выделяющиеся овальной формы (похожие на лимон) трихинеллезные капсулы. Средняя величина капсул у человека составляет 0,4 х 0,26 мм. В капсуле, как правило, содержится одна спирально свернутая в 2,5 оборота трихинелла. При высокой интенсивности инвазии в одной капсуле может быть 2 или 3 личинки. Смежные с капсулой мышечные волокна теряют свою поперечную исчерченность и принимают гомогенный вид.

Таким же способом исследуют мясо или мясные продукты, явившиеся причиной заражения.

Метод переваривания мышц . Метод более эффективен.

Ход исследования. Исследуемые мышцы мелко измельчают и заливают искусственным желудочным соком в соотношении 1:15-20. Полученную смесь помещают в термостат при 37°С на 12-16 ч. По истечении этого срока микроскопируют осадок, в котором среди массы остатков переваренных мышечных волокон обнаруживаются личинки трихинелл в свободном состоянии.

Искусственный желудочный сок можно приобрести в аптеке или приготовить в лаборатории. Для этого к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; перед использованием к 1 л разведенной кислоты добавляют 30 г пепсина.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Количественные методы исследования применяются при определении интенсивности инвазии, оценке эффективности различных антигельминтных препаратов, определении качества дегельминтизации, контроле проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий и др.

Количественное определение яиц гельминтов проводится двумя методами: методом Столла и методом Красильникова и Волковой (1974).

Метод Столла . Для проведения исследования необходимо иметь микроскоп, стеклянную колбу с отметкой 56 и 60 мл, мерный цилиндр, стеклянные бусы, резиновую пробку для колбы, градуированные пипетки, предметные стекла и 0,4% раствор едкого натра.

Ход исследования. В колбу мерным цилиндром наливают децинормальный раствор едкого натра (примерно 0,4% концентрации) до метки 56 мл и добавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет отметки 60 мл (т.е. 4 мл испражнений). Смесь тщательно взбалтывают со стеклянными бусами в течение 1 минуты, закрыв сосуд резиновой пробкой (можно перемешать и палочкой). Тотчас после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси (в ней содержится 0,005 мл испражнений), переносят на предметное стекло и подсчитывают количество яиц в препарате под микроскопом. Чтобы определить количество яиц в 1 г испражнений, обнаруженное число умножают на 200.

Сравнение числа яиц в препарате, обнаруженное у больного до проведения лечения и после него позволяет судить об эффективности дегельминтизации.

Метод Столла прост, дает сравнимые результаты при всех гельминтозах, возбудители которых систематически выделяют яйца в кишечник больного. Однако недостатком метода является его относительно низкая чувствительность, особенно при слабой интенсивности инвазии.

Метод Красильникова-Волковой . При исследовании этим методом не менее 1 г фекалий смешивают в стеклянной колбочке или большой пробирке с 1% раствором "Лотоса" (или 1,5% раствором "Экстры") в соотношении 1:10. Взвесь тщательно взбалтывают до образования гомогенной суспензии, затем быстро набирают градуированной пипеткой 0,1 мл взвеси (что равняется 0,01 г фекалий) и переносят на предметное стекло. Препарат покрывают покровным стеклом или целлофановой пластинкой (20 х 30 мм), выдержанной не менее одних суток в 50% водном растворе глицерина.

Подсчитывают число яиц во всем препарате. Для расчета количества яиц в 1 г фекалий полученное число надо умножить на 100.

Этот метод имеет ряд преимуществ перед методом Столла. Во-первых, он более чувствителен и позволяет выявлять гельминтов при слабой степени инвазии. Во-вторых, он очень удобен при массовых обследованиях, так как растворы детергентов, являясь консервантами яиц гельминтов, позволяют проводить исследования и не совсем свежего материала. Однако обязательным условием при этом является сбор фекалий непосредственно в раствор детергента.

Для количественного исследования можно применять любой из описанных унифицированных качественных методов, основанных на принципе всплывания яиц. Но в этом случае для анализа должно быть взято одно и то же количество фекалий, один и тот же объем флотационного раствора. Расчет степени инвазии можно произвести, зная количество яиц в 1 г фекалий, по приведенной таблице.

Интенсивность инвазии в зависимости от числа яиц гельминтов

в 1 г фекалий

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

Эти методы, основанные на выявлении специфических антител в сыворотке крови, применяются с диагностической и скрининговой целями.

К серологическим методам относятся:

Реакция кольцепреципитации (РКП) (трихинеллез, цистицеркоз);

Реакция кольцепреципитации в пробирках на холоде (трихинеллез, цистицеркоз);

Реакция микропреципитации на живых личинках (трихинеллез, аскаридоз);

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) (трихинеллез, эхинококкоз, альвеококкоз, цистицеркоз и др.);

Реакция агглютинации латекса (РАЛ) (эхинококкоз, альвеококкоз, трихинеллез, тениаринхоз и др.);

Реакция связывания комплемента (РСК) (трихинеллез, эхинококкоз, цистицеркоз);

Реакция энзим-меченных антител (РЭМА) (эхинококкоз, онхоцеркоз, шистосомозы, трихинеллез, токсокароз);

Иммуноферментный анализ (ИФА) (трихинеллез, описторхоз, токсокароз, токсоплазмоз и др.).

Для постановки серологических реакций выпускаются стандартные антигены или же они готовятся самостоятельно (например, из эхинококковых пузырей овец), выпускаются специальные тест-системы для ИФА.

Специальные методы исследования на энтеробиоз, тениаринхоз, тениоз

Соскоб с перианальных складок . Для получения соскоба с перианальных складок можно применять деревянный шпатель, целлофановую полоску, целлюлозную бумагу или ленту, глазные палочки со специальным клеевым слоем:

а) соскоб деревянным шпателем (шпатель – уплощенная спичка или палочка), смоченным 1% раствором глицерина (или 0,5% раствором питьевой соды), производится легким соскабливанием с поверхности перианальных складок по всей окружности анального отверстия. Полученный соскоб переносят краем покровного стекла с конца шпателя на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают этим же покровным стеклом и микроскопируют. Недостатком метода является недостаточная выявляемость яиц и раздражающее действие;

б) по методу Торгушина делают смыв ватным тампоном на деревянном или другом шпателе, смоченном 50% раствором глицерина, и готовят мазок на предметном стекле в капле глицерина;

в) по методу Кеворковой в центрифужную пробирку наливают около 5 мл кипяченой воды, помещают в него шпатель (палочку) с ватным тампоном. Перед взятием материала тампон слегка отжимают о внутреннюю стенку пробирки, обтирают им перианальные складки и вкладывают шпатель с тампоном в пробирку. Тщательно взбалтывают тампон в пробирке, смыв центрифугируют 3 мин и полученный осадок исследуют под микроскопом;

г) соскоб липкой лентой по Грэхэм. Часть липкой ленты (прозрачная полиэтиленовая лента с липким слоем для детского творчества, но лучше использовать операционную пленку ЛПО-1, ЛПО-2) длиной 8-10 см приклеивают липким слоем к перианальным складкам кожи, держа за концы, а затем переносят ее на предметное стекло липким слоем вниз (концы ленты, выходящие за края стекла отрезают), стекла нумеруются, а в журнале записываются данные больного и номер стекла. В лаборатории ленту с одного конца отклеивают на большом протяжении, капают под нее 1-2 капли вазелинового масла или глицерина (для устранения оптических дефектов) и микроскопируют;

д) соскоб с помощью стеклянных глазных палочек, поверхность которых покрыта специльным клеевым составом. Глазные палочки устанавливаются в специальный штатив. Забор материала производится путем соприкосновения плоской части лопаточки к коже перианального отверстия. Затем палочка снова укрепляется в штатив для транспортировки. Микроскопия проводится непосредственно на лопаточке с обеих сторон (без предметных и покровных стекол) с предварительным креплением в кассеты при малом увеличении (окуляр х 10, объектив х 8). По окончании работы палочки дезинфицируются кипячением в мыльном растворе, а штатив и кассеты обрабатываются спиртом и промываются мыльно-содовым раствором. Состав клея: клеол – 10 г, касторовое масло – 2,5 г, этиловый эфир – 5 г, этиловый спирт 96% - 2,5 г.

Лопаточки обмакиваются в раствор клея, затем высушиваются на воздухе при комнатной температуре. Образовавшаяся на поверхности клейкая пленка сохраняется в течение нескольких дней.

Метод удобен при массовом обследовании детского населения на энтеробиоз и взрослого населения на тениидозы.

Дополнительно к методу соскоба при тениаринхозе и тениозе применяются также метод опроса и описанный выше макроскопический метод (при выявлении члеников).

Специальные методы исследования на стронгилоидоз

Применяют эфир-уксусный метод для обнаружения яиц (см. выше) и метод Бермана для обнаружения личинок в испражнениях.

Метод Бермана . Исследуют свежий кал, лучше после принятия слабительного. Пробу фекалий 5 г помещают на металлическое сито (сетку внутри выстилают двумя слоями марли) в стеклянную воронку, закрепленную в штативе. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом (аппарат Бермана).

Сетку с испражнениями приподнимают и в воронку наливают нагретую до 40-50°С воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду и кал покрылся водой целиком. Через 2-4 ч зажим на резиновой трубке быстро открывают, и жидкость спускается в центрифужную пробирку. После центрифугирования (1-2 мин) верхнюю часть жидкости быстро сливают, а осадок в количестве 1 мл наносят тонким слоем на предметное стекло и микроскопируют под малым увеличением микроскопа.

Метод ИМП и ТМ . В химический стаканчик помещают порцию фекалий величиной с орех, заливают теплым 40°С физраствором, чтобы фекалии покрылись раствором, оставляют на 20 мин. Через 20 мин сливают жидкость в чашку Петри и просматривают под бинокулярным микроскопом МБС.

Для диагностики стронгилоидоза, особенно для контроля за эффективностью лечения, рекомендуется сочетать метод Бермана с исследованием дуоденального содержимого.

Специальные методы исследования на нематодозы

Нематозы

Аскаридоз

В анамнезе обращается внимание на отношение к огородничеству, садоводству. Употребление в пищу сырых овощей, салатов, приготовленных из этих овощей.

Клинические проявления ранней фазы аскаридоза обусловлены аллергическими перестройками организма. Ранняя или миграционная личиночная стадия аскаридоза протекает нередко при наличии лихорадки с температурой тела до 38° и выше, с симптомокомплексом поражения легких, наличием выраженной эозинофилии крови. В большинстве случаев у детей первыми признаками заболевания являются недомогание, слабость, периодические головные боли, потливость, иногда боли в мышцах, суставах. Нередко появляется обильная сыпь типа крапивницы с сильным или умеренным зудом. Диагноз ранней фазы подтверждается рентгенологическими исследованиями на наличие в легких летучих эозинофильных инфильтратов Леффлера. В мазках свежевыделенной мокроты нередко обнаруживаются эозинофильные клетки, эритроциты, кристаллы Шарко-Лейдена и личинки аскарид.

При кишечной имагинальной стадии аскаридоза отмечается сочетание проявлений со стороны желудочно-кишечного и астенического синдромов, энтероколитический болевой симптомы. У детей нередко отмечается снижение в весе, порой довольно значительно. Тошнота, повышенная саливация, раздражительность, задержка психомоторного развития, снижение интеллекта.

Для лабораторной диагностики кишечной ст

Исходный уровень знаний и навыков.

Учащийся должен знать:

1. Представителей трема­тод описторха, парагонима, фасциолу, дикроцелия.

2. Жизненные циклы, пу­ти заражения трема­тод, клиническую картину болезни, сроки хранения фекалий

Учащийся должен уметь:

1. Определить яйца трематод по ри­сункам, таблицам.

2. Формировать меры про­филактики.

3. Приготовить нативный мазок, большой мазок, мазок по Като, оценить свою работу, работать с микроскопом.

4. Опре­делять яйца трематод в препаратах, соблю­дать правила охраны труда, соблюдать правила сан.-эпид. режима.

Структура занятия:

Теоретическая часть:

Ø Микролекция.

Практическая часть:

Ø Приготовление нативного мазка, большого мазка, мазка по Като, оценка работы, микроскопия

Микролекция.

Сбор и доставка материала

Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики гельминтозов является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях, моче, крови и других биологических жидкостях при микроскопическом исследовании. Материалами для исследований служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биопсированные ткани и другие материалы.

Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластиковую посуду, которая сопровождается направлением с указанием ФИО обследуемого. При массовом обследовании допускается сбор фекалий в стаканчики из парафинированной бумаги, целлофановые пакеты.

Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию непозднее одних суток, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно после их выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.

Для выявления яиц и личинок некоторых видов гельминтов используют специальные методы: метод Бормана, перианальный соскоб, метод мазков-отпечатков с помощью липкой ленты, культивирование личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори) и др.

Практическая часть:

Наиболее распространенным методом исследования фекалий на наличие в них яиц гельминтов являются методы нативного мазка, толстого мазка под целлофаном и большого мазка.

При изучении яиц гельминтов под микроскопом целесообразно сопоставлять видимое изображение с его характеристикой в определителе яиц гельминтов.

Метод нативного мазка

Оборудование:

предметные стекла;

широкая кювета;

пластиковые палочки;

карандаш;

50 %-ный водный раствор глицерина (смешивают равные части глицерина и дистиллированной воды);

сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза;

микроскоп.

Ход работы

1. Разложить предметные стекла в кювете, пронумеровать предметные стекла.

2. Нанести пипеткой по 2 капли 50 %-ного водного раствора глицерина на расстоянии 4 см одна от другой на предметные стекла.

3. Взять палочкой кусочек фекалий, размером со спичечную головку (30-50 мг), внести его в каплю глицерина и растереть до равномерной суспензии.

4. На каждом стекле готовят по два нативных мазка, которые не должны сливаться между собой и не доходить до краев, чтобы не испачкать пальцы лаборанта. Для каждой пробы используют новые палочки.

5. Препараты, не накрывая покровными стеклами, исследовать под микроскопом (объектив 8х, окуляр 10-15х).

6. По окончании исследования погрузить препараты в сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза.

Метод толстого мазка под целлофаном.

Метод предложен К. Като, М. Миуром в 1954 г. Мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопического целлофана, пропитанного глицерином.

Рис. Приготовление толстого мазка под целлофаном:

а - нативный мазок; б - придавливание резиновой пробкой комочка фекалий, покрытых целлофаном; в - толстый мазок под целлофаном (по Ю.А. Березанцеву и Е.Г.Автушенко, 1976)

Оборудование:

широкая кювета;

полоски целлофана 22x30 мм, обработанные смесью Като в течение 24 ч;

смесь Като (3 % -ный раствор малахитового зеленого -6 мл, 6 % -ный раствор фенола - 500 мл, глицерин - 500 мл, 3,5 мл смеси хватает на 100 полосок);

резиновые пробки крупные;

пинцет анатомический;

пластиковые палочки;

карандаш;

микроскоп.

Ход работы

1. Разложить в кювете предметные стекла, пронумеровать предметные стекла.

2. Набрать палочкой фекалии размером с полгорошины (50-60 мг) и поместить на предметное стекло в центр.

3. Достать из банки пинцетом целлофановую полоску, обработанную по Като, и наложить на пробу кала на предметном стекле.

4. Придавить целлофан резиновой пробкой, чтобы кал распределился равномерно, не вытекая за края полоски.

5. Оставить препарат до просветления на 60 мин и затем исследовать под микроскопом (объектив 8-40х, окуляр 10х).

6. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.

7. Убрать рабочее место, вымыть руки.

Метод большого мазка.

Метод был предложен Ю.А. Березанцевым и Е.Г. Автушенко в 1973 г. Суть метода основывается на применении бинокулярного микроскопа и нативного мазка на стекле 6x9 см, позволяющего одномоментно исследовать до 200-300 мг кала.

Оборудование:

предметные стекла 6x9 см и 7x10 см;

пластиковые палочки;

50 %-ный раствор глицерина (глицерин и дистиллированная вода в равных частях);

сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза;

микроскоп;

эмалированная кювета;

карандаш.

Ход работы

1. Разложить предметные стекла 7x10 см в кювете, пронумеровать предметные стекла.

2. Затем на каждое предметное стекло положить второе предметное стекло 6x9 см.

3. Нанести пипеткой на предметное стекло размером 6x9 см 15-20 капель 50 % -ного раствора глицерина.

4. Взять палочкой из разных мест кусочки кала величиной со среднюю горошину (200-300 мг) и опустить его в раствор 50 %-ного глицерина на предметном стекле.

5. Растереть палочкой кусочек кала в глицерине до равномерной суспензии, чтобы занимаемая им площадь составляла около 33-34 см 2 . Мазок не покрывать покровными стеклами.

6. Взять большое покровное стекло 7x10 см за края вместе с находящимся на нем большим мазком (чтобы не запачкать пальцы).

7. Исследовать большой мазок при увеличении 34х (объектив 2х, окуляр 17х) и 50х (объектив 4х, окуляр 12,5х). В сомнительных случаях исследования проводят на большом увеличении.

8. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.

9. Убрать рабочее место, вымыть руки.

При таком методе исследования определяются крупные яйца гельминтов (аскариды, власоглава, анкилостомид, острицы, лентеца широкого, тениид, фасциолы). Они выглядят несколько иначе, в связи с чем необходим некоторый опыт, чтобы их быстро обнаружить. Большие мазки можно применять для исследования на яйца шистосом и личинок угрицы кишечной. Большой мазок содержит в 6-10 раз больше исследуемого материала, чем нативный мазок. Во столько же раз выше его эффективность.

Похожая информация.

Трихомониаз — очень распространённая половая инфекция, но точно подтвердить её без лабораторных анализов невозможно. Ещё в 1980-е годы исследования показали: если ограничиваться только опросом и осмотром пациента, то правильно диагностировать трихомоноз можно только в 12% случаев. Поэтому лабораторная диагностика трихомониаза у мужчин и женщин значит очень много.

Чтобы выявить возбудителя (влагалищную трихомонаду), врачи используют разные методы исследования. Какие-то анализы точнее, а какие-то — часто ошибаются; некоторые стоят умеренно, а некоторые — довольно дороги.

Разбираемся, какие бывают анализы на трихомониаз у мужчин и женщин: точность методов, стоимость, плюсы и минусы.

Кратко о каждом методе: Микроскопия, посев, ПЦР, ИФА, РИФ

При подозрении на любое инфекционное заболевание пациенту назначают общие анализы крови и мочи. Их результаты могут сигнализировать о воспалении, но не показывают, какой именно возбудитель является причиной.

Например, при воспалении из-за трихомонады уровень лейкоцитов в крови может быть повышен — но также он будет повышенным и при воспалении по причине других инфекций. Поэтому данный анализ не говорит ничего конкретного.

Чтобы точно определить возбудителя, нужны другие методы диагностики. Есть несколько принципиально разных способов обнаружить трихомонады. Они отличаются по сложности выполнения, срокам и достоверности. Так или иначе, все они нашли свое место в диагностике заболевания.

Разберём подробнее эти методики и роль, которую они играют в постановке правильного диагноза.

Микроскопия нативного мазка

Термином «нативный» в медицине и биологии называют предмет или материал, который находится в природном состоянии — то есть его никак не изменяли и не обрабатывали. Соответственно, нативный мазок — это обычный мазок с половых или выделительных органов человека, который не окрашивают и никак не изменяют для исследования.

Изучение такого мазка под микроскопом — самый распространенный метод диагностики трихомониаза. Как выглядят трихомонады в нативном мазке, можно увидеть ниже на фото.

Для этого анализа нужны выделения и немного клеток:

• из уретры
• влагалища
• цервикального канала пациента/пациентки.

Строго говоря, процедуру следует называть не «мазок», а «соскоб», потому что для материала берут не только выделения, но и сами клетки слизистой. Сдавать соскоб не очень приятно, но не больно.

Взятый материал помещают в пробирку и направляют в лабораторию.

В лаборатории клетки из соскоба изучают под микроскопом. Если среди них в мазке есть трихомонада, её выдадут:

• крупные размеры (в сравнении с человеческими летками)
• наличие жгутиков
• характерная подвижность.

С помощью этого метода отличить трихомонаду от других микробов можно с вероятностью 80-100%.

Но есть у нативного мазка и минусы.

К сожалению, долгая транспортировка материала до лаборатории может значительно снизить точность метода. Дело в том, что с момента взятия материала трихомонады с каждой минутой теряют подвижность, и распознать их становится тяжелее. В идеале клетки из соскоба надо сразу поместить под микроскоп. По правилам, нативный материал рекомендуется исследовать не позднее, чем через 10 минут после соскоба. Но в условиях обычной российской больницы или лаборатории такое почти неосуществимо.

Именно поэтому точность микроскопии нативного мазка не очень высока и составляет от 40% до 80%. То есть трихомонаду по-прежнему не перепутают с другими возбудителями, если она подвижна — но могут не обнаружить ее совсем, если она не двигается.

Несмотря на недостатки, данный метод может быть полезен при профосмотрах или первичных визитах к венерологу. Он не требует сложного оборудования и позволяет заодно выявить другие микроорганизмы (но не все) при смешанном заражении. Кроме того, такой анализ можно абсолютно бесплатно сдать в государственном лечебном учреждении. В частных клиниках, цена на услугу составляет 150-200 рублей.

Микроскопия окрашенного мазка

Исследование окрашенных мазков повышает шансы обнаружить трихомонаду. Материал берут также, как и нативный мазок (то есть, по сути, это тоже — соскоб). Но для этого исследования материал уже специально подготавливают: перед тем, как рассматривать под микроскопом, к нему добавляют особые вещества. Это красители, которые придают цвет трихомонаде — если, конечно, она есть в мазке. Так лаборанту проще отличить trichomonas vaginalis от других клеток и частиц. Вся процедура не превышает одного часа.

Но и этот анализ не совершенен. Дело в том, что не все красители позволяют отличить возбудителя инфекции от человеческих клеток.

Чаще всего для подготовки материала применяют метиленовый синий краситель или окрашивание по Граму (сложный метод окрашивания с использованием нескольких красящих веществ). К сожалению, эти способы не позволяют достаточно четко выделить трихомонаду среди клеток эпителия и иммунных клеток. Распознать микроба сложно, потому что трихомонада походит на человеческие клетки и окрашивается с ними почти одинаково.

Гораздо эффективнее окрашивание по методу Романовского-Гимзе . Краска Романовского имеет сложный состав, который включает метиленовый синий, эозин и азур, и позволяет четко выделить трихомонаду из окружающих клеток. Окрашивание этим методом используют далеко не в каждой лаборатории — готовить этот красящий раствор довольно сложно, что увеличивает стоимость анализа.

В зависимости от красящего вещества, цена анализа составляет в среднем 400 — 600 рублей. В некоторых регионах анализ доступен бесплатно по программе ОМС .

В среднем достоверность метода составляет 80%.

Исследование мазка под микроскопом, будь то нативный или окрашенный мазок, еще называют бактериоскопическим исследованием .

Культуральное исследование (посев)

По сравнению с микроскопией нативного и окрашенного мазков, культуральный метод диагностики намного эффективнее. Например, в 1990 году в ходе сравнительного исследования точно выявить трихомонаду получилось у 80% пациентов именно с помощью посева.

Суть метода в том, что на питательную среду помещается материал, взятый от пациента (при подозрении на трихомониаз — это мазок из половых органов). Попав в «пищевой рай», трихомонады, которые есть мазке, интенсивно размножаются, и через 3-4 дня их легко обнаружить под микроскопом. Если же микробы не размножились — с большой вероятностью их не было в мазке, и значит, человек здоров.

Питательная среда — это вещество или смесь веществ, которая подходит для выращивания микроорганизмов. Для каждого возбудителя нужен свой состав питательной среды: на одних средах они размножаются хорошо, а на других — могут вообще не плодиться.

Очень хорошо трихомонада растет на питательных средах импортного производства, например, InpouchTV и Diamond. Но в нашей стране эти среды используют очень редко, обычно — в частных клиниках, потому что это дорогие смеси.

Но даже с учётом российских условий бакпосев на трихомонады — один из самых надежных анализов. Его точность на качественных питательных средах достигает 90%. Тем не менее культуральное исследование назначают далеко не всегда, поскольку оно требует времени и финансовых затрат.

Цена на исследование колеблется от 500 до 5000 рублей, что во многом зависит от используемой питательной среды и финансовой политики учреждения.

Метод ПЦР

Лабораторные исследования способны практически безошибочно диагностировать трихомониаз. Самыми достоверными из них являются ПЦР и культурологическое исследование. Если анализы, полученные этими методами отрицательны, то это практически на 100 процентов свидетельствует об отсутствии заболевания, о чем бы не говорили другие методы.

Помните, что какими бы не были результаты анализов, ничего страшного и непоправимого не случилось, и избавиться от этой неприятной инфекции совсем несложно.

Гельминтозы человека - одна из самых распространенных групп заболеваний среди населения земного шара. При любом подозрении на заражение гельминтами необходимо сдать анализ на яйца глист. От правильности сбора материала зависит достоверность результатов, поэту важно знать особенности сдачи анализа.

Что обнаруживает анализ

Анализ кала на яйца глистов показывает заражение следующими гельминтами:

Вместе с анализом кала на яйцеглист часто назначается микроскопирование фекалий на цисты и вегетативные формы простейших микроорганизмов.

Это исследование проводится из того же материала. Оно позволяет выявить наличие цист и взрослых форм простейших в нижних отделах желудочно-кишечного тракта.

Когда требуется обследование

Направление на анализ кала на яйца глист дается при следующих обстоятельствах:

Сколько действует справка на яйцеглист? Результат исследования действителен 10 дней.

Как сдавать анализ правильно

От правильности сбора материала для исследования зависит достоверность результата и постановка правильного диагноза.

Какой-либо специфической подготовки не требуется. Достаточно перед тем, как сдать анализ соблюдать некоторые простые правила:

1. Кал нужно собрать в сухую, чистую, плотно закрывающуюся емкость. Специальные баночки под анализы можно приобрести в любой аптеке.
2. Перед актом дефекации нельзя мочиться, чтобы моча не попала в кал.
3. Собрать материал для исследования надо из разных частей каловых масс.
4. Перед забором кала нужно исключить прием слабительных средств, любых препаратов, влияющих на перистальтику кишечника, а также веществ, способных менять окраску фекалий. Нельзя применять лекарственные средства местного действия (свечи, крема, мази).
5. Женщинам нельзя сдавать анализ вовремя менструации.
6. Объем материала должен составлять 1-2 чайных ложки.

Хранить собранный анализ не рекомендуется. Лучше отнести его в лабораторию через 30-40 минут после сбора. Если это невозможно, то нужно поместить материал в холодильник при температуре 5-8 градусов. Хранить не более 8 часов. Чем больше пройдет времени от сдачи материала до доставки его на анализ, тем ниже его достоверность.

Нельзя забывать подписывать контейнеры с материалами на анализ. Приобрести тару можно в любой аптеке, или ее выдадут в лаборатории.

Правила забора материала на анализ для выявления цист и вегетативных форм простейших ничем не отличаются от приведенных выше.

Анализ на энтеробиоз

Из-за особенностей жизненного цикла остриц для диагностики энтеробиоза обычного анализа кала на яйца глистов бывает недостаточно. Тогда делают перианальный соскоб.

Соскоб - это метод обследования, когда материал для изучения получают из области анального отверстия.

1. Метод Грэхема. Суть - забор материала с помощью ленты с липким слоем. Она наклеивается в области ануса, через несколько секунд снимается. Яйца гельминта приклеиваются на ленту.
2. Соскоб по Рабиновичу. Для взятия препарата для исследования используются глазные стеклянные палочки с нанесенным на них специальным клеем для захвата яиц остриц.
3. Соскоб ватным тампоном. Чаще используется у взрослых.

Нельзя ходить в туалет (то есть совершать акт дефекации и мочится). Запрещены любые гигиенические процедуры: подмывание, подтирание салфеткой.

Забор делается в домашних условиях. Для этого применяют наборы, которые выдает врач, лаборатория, или они самостоятельно приобретаются в аптеке. Их два вида:

• со специальной пластиковой пробиркой;
• с предметным стеклом с наклейкой.

Алгоритм сбора набором со специальной пробиркой:

1. Вымыть руки.
2. Надеть латексные или целлофановые перчатки.
3. Палочкой, находящейся в пробирке провести по коже вокруг ануса.
4. Поместить палочку обратно в пробирку.
5. Плотно закрыть крышкой.
6. Выкинуть перчатки. Тщательно вымыть руки.
7. Доставить пробирку в лабораторию.

Алгоритм сбора набором с предметным стеклом:

1. Надеть перчатки.
2. Аккуратно отклеить ленту. Касаться клейкой части нельзя.
3. Наклеить вокруг анального отверстия.
4. Через 2-3 секунды отклеить.
5. Поместить ленту на предметное стекло.
6. Убрать в пакет.
7. Выкинуть перчатки и тщательно вымыть руки.
8. Доставить предметное стекло в лабораторию.

Методы выполнения анализа

Для развернутой гельминтоовариооскопии используют метод Като (метод «толстого мазка»). В нем применяют гидрофильный целлофан, которым накрывают мазок, а также раствор для осветления, состоящий из Малахитовой зелени, Глицерина и Фенола.

Исследование часто проводят с одним из методов обогащения:

• по Калантарян;
• по Фюллеборну.

Оба метода заключаются в удалении с помощью солевых растворов крупных частиц кала и осаживании яиц гельминтов в осадке. Таким образом, количество яиц в микроскопируемом содержимом увеличивается, и повышается вероятность их обнаружения.

Оценка результатов

Для предотвращения получения ложноотрицательных результатов при наличии симптоматики и эпидемиологического анамнеза обследования назначаются несколько раз с перерывом в несколько дней.

Как правильно собрать и сдавать анализы кала на яйца глист

Анализ кала на яйца глист – прямой способ для их определения. Можно выявить самих глистов и простейших их форм – цист, личинок и вегетативных форм. Если при обнаружении были обнаружены гельминты и простейшие их формы, дополнительные исследования назначаются в редких случаях.

Пренебрежение повторным анализом гарантирует то, что гельминтозы будут спокойно развиваться в организме.

Емкость для анализа

С процедурой взятия кала для анализа сталкивался каждый человек хотя бы один раз за свою жизнь. Произвести ее очень легко. Сама процедура несложная, однако есть ряд определенных правил, следование которым обеспечит более точный результат.

1. Анализ кала на глисты начинается с подготовки инструментов. Стерильная посуда – некритичное требование для того, чтобы сохранять стул. Специальные баночки можно приобрести в аптеке или подготовить их самостоятельно.
2. Чтобы сделать посуду стерильной, некоторые мамы ошпаривают ее кипятком. Для экономии средств испражнение можно поместить в обычную стеклянную баночку. Для этой цели подойдет даже пластмассовая посуда.
3. Чтобы обеспечить хорошую герметизацию, обязательное наличие крышек. Их всегда можно приобрести в аптеке, если нет желания мастерить что-то самому.
4. Аптечные емкости имеют в наборе ложечки. С их помощью помещают экскременты в емкость, что упрощает забор кала.
5. Некоторые поликлиники, проводящие анализ кала на яйца глист, выдают такие баночки бесплатно, взяв при этом плату за саму процедуру. В подобных емкостях спокойно можно хранить кал некоторое время до начала анализа.
6. Лаборатория не будет исследовать собранный стул, если он был принесен в коробках из картонной бумаги и подобных приспособлений.

Правила сдачи кала

Конечно, сделать это взрослому человеку легко, но даже такая простая процедура требует соблюдать правила сдачи.

1. Перед тем как сдавать кал, следует отказаться от приема слабительных средств, не делать клизм и не ставить свечи – это влияет на достоверность результата.
2. Собирающийся кал, который будет отправляться на анализ, не должен содержать в себе инородные жидкости – сточную воду, мочу, средства личной гигиены и любые другие выделения. Чтобы исключить попадание различных жидкостей, нужно использовать небольшой лоток.
3. Многие люди не знают, как правильно собрать кал, и делают ошибки. Материал на анализ собирается с различных участков. Готовое количество не должно превышать двух чайных ложек.
4. Лучше собрать анализ после того, как человек помочился. Особенно это касается маленьких детей.
5. У малышей собирать кал можно прямо из памперса.
6. Перед процедурой необходимо подготовить небольшую емкость с крышкой, после чего собрать кал, закрыть крышкой и подписать. Достаточно указать инициалы и дату забора.

Сдача и хранение

Лучше всего анализ делать в день сбора кала, но не все люди могут похвастаться регулярностью процесса. В отличие от мочи, кал годный более длительное время. Делают это с вечера – за сутки до исследования. Хранить кал на яйца глист можно только в закрытой емкости при температуре от 5 до 8 градусов.

В зимнее время подойдет хранение на подоконнике, а летом – в холодильнике. После этого доставка материала в лабораторию должна осуществиться как можно скорее.

Сколько делают анализ

Делается анализ кала в лаборатории. На изучение может понадобиться несколько дней. Готовый результат указывается на специальном бланке, который будет свидетельствовать о наличии или отсутствии глистов. После получения результатов больной готовится к дальнейшему исследованию.

Даже если при сборе кала на яйца глистов результат отрицательный, это не значит, что человек полностью здоров. В некоторых случаях личинок гельминтов не сразу получается обнаружить в испражнениях. Это объясняется тем, что яйца не всегда могут выходить с отходами.

В каких случаях может проводиться исследование

Рассмотрим, как сдавать анализы кала на яйца глист и в каких случаях это необходимо.

Энтеробиоз, который сопровождается следующими симптомами:

• слизь и кровь в испражнениях;
• позывы к рвоте;
• тошнота;
• боли в животе.

О чем говорит результат анализа

Срок действия анализа кала на яйца глист ограничен, поэтому важно провести процедуру вовремя и получить действительный результат. Расшифровка не вызывает трудностей – даже обычный человек может понять, каким оказался анализ. Лечащий врач делает на бланке указание «Обнаружено» или «Не обнаружено».

• круглые черви, вызывающие энтеробиоз;
• ленточные черви;
• нематоды.

Если результат оказался отрицательным, исследование кала на простейшие и яйца гельминтов повторяется еще 2 раза через каждые 4 дня. Только после этого можно рассматривать окончательный результат.

Особенности анализа

Аскаридоз

Исследование кала на простейшие и яйца гельминтов с помощью микроскопа свидетельствует о том, что болезнь находится в кишечной стадии. Кал на яйца глист, личинки которых находятся в мокроте, говорят о фазе миграции. Большое содержание в крови – повышенный уровень специфических антител.

Дуоденальное содержимое с яйцами аскарид – наличие гельминтов в панкреатических протоках.

Энтеробиоз

При анализе на энтеробиоз необязательно использовать каловый метод. Но как собрать при этом материал? На самом деле все очень просто: надо использовать специальную ватную палочку. Называется эта процедура соскобом перианальных складок. Энтеробиоз ставится в том случае, если в результате анализа были обнаружены яйца остриц.

Обнаружить яйца можно не сразу, поэтому анализ на яйцеглист проводят несколько раз подряд. Между процедурами должно пройти от 4 дней до недели.

Лямблиоз

Анализ кала на гельминты помогает выявить лямблий. После сдачи кала проводится повторное микроскопическое исследование.

Заключение

Мы подробно рассмотрели, как нужно сдавать анализ кала на яйца глистов. Процедура несложная, но это не значит, что можно забыть правила сбора. Не забывайте о том, сколько можно хранить фекалии перед исследованием.

Вы даже что-то читали о лекарствах, призванных победить заразу? И в этом нет ничего удивительного, ведь глисты смертельно опасны для человека – они способны очень быстро плодиться и долго жить, а болезни, которые они вызывают, проходят тяжело, с частыми рецидивами.

Плохое настроение, отсутствие аппетита, бессонница, дисфункция иммунной системы, дисбактериоз кишечника и боль в животе… Наверняка вы знаете эти симптомы не понаслышке.

Гельминтозы или глистные инвазии очень распространены среди населения. Согласно статистике, зараженность в западноевропейских странах достигает 50%, в России – 70%. Но наибольшая заболеваемость гельминтозами выявлена при выборочном обследовании населения юго-восточных и африканских государств, где она приближается практически к 100%.

Состояние здоровья у таких людей ухудшается: появляются симптомы различных хронических заболеваний – гастрита, гепатита, развивается анемия, аллергические реакции и другая патология. И сколько бы ни проводилось лечение, оно безуспешно, потому что не выявлена истинная причина болезни. Кроме того, они являются «ходячей инфекцией», подвергая опасности заражения других людей, особенно если в окружении есть ребенок.

Дети, ввиду своей активности и неосведомленности, быстро «подхватывают» инфекцию, не менее активно ее распространяют, и нередко тяжело заболевают. А таблетки от глистов для детей довольно часто бывают очень токсичными, вызывают побочные явления.

Поэтому выявление яиц глистов в кале, рано начатое лечение предупреждают как развитие осложнений гельминтоза, так и заражение окружающих. На основании результата анализа также подбираются глистогонные средства для людей в индивидуальном порядке.

Кому показано исследование на яйца глистов?

Исследование кала на заражение глистами проводится в 3-х случаях:

1. При подозрении на гельминтоз.
2. Профилактическое или «барьерное» обследование.
3. По желанию пациента.

Подозрение на гельминтоз

Заподозрить глистную инвазию (заражение) можно на основании следующих симптомов:

• нарушение работы кишечника (вздутие, запоры, поносы);
• неприятные ощущения в животе – урчание, покалывание;
• общая слабость, недомогание, плохой сон;
• повышенная нервозность, возбудимость, особенно у ребенка;
• бледность кожи;
• снижение веса;
• наличие аллергических высыпаний на коже и слизистых оболочках;
• ухудшение зрения.

«Барьерное» обследование

Согласно приказу Минздрава, это обследование обязательно должны проходить следующие категории людей:

• направляемые на работу в детские учреждения;
• оформляющиеся в предприятия общественного питания, торговую сеть, учреждения массового пребывания людей – санатории, интернаты, дома отдыха;
• идущие на работу в сферу коммунальных и бытовых услуг;
• оформляющиеся в медицинские учреждения – весь персонал, в косметологические и массажные кабинеты, фитнес-клубы, бассейны, парикмахерские;
• проходящие обследование для госпитализации, на операции, для санаторного лечения.

На всех лиц этих категорий оформляется санитарная книжка, куда вносятся результаты медицинского обследования, в том числе и на зараженность глистами. При его обнаружении допуск к работе запрещен до излечения и повторного обследования. Подобный анализ также нужно сдавать во время прохождения этими же категориями людей периодических медицинских осмотров.

Обследование по желанию пациента

Любой человек, допускающий вероятность заражения глистами, может обратиться для обследования и сдавать анализ. Например, если ему довелось побывать в местах с плохими санитарными условиями, в местах большого скопления людей, или же он прибыл из юго-восточных и африканских стран.

Совет: если у вас выявлены яйца глистов, до завершения лечения и контроля следует избегать посещения людных мест, продуктовых магазинов, баров, ресторанов, избегать контакта с ребенком. Будьте гуманны, заботьтесь о здоровье окружающих.

Какие виды гельминтов можно обнаружить в анализе кала?

• острицы (энтеробиоза);
• аскариды человеческой;
• власоглава (трихоцефалез);
• трематоды (описторхоз, фасциолез);
• ленточных червей (солитеров) – бычьего цепня, свиного цепня, гименолепидоза (карликового цепня), дифиллоботриоза (лентеца широкого).

Существует и множество других видов, не получивших большого распространения в наших широтах.

Как правильно собрать анализ?

Для правильного сбора анализа кала нужно соблюдать следующие требования:

Совет: далеко не всегда яйца глистов обнаруживаются с первого раза. Согласно правилам, проводится троекратное исследование с интервалом в 1 неделю, или же столько раз, сколько посчитает нужным врач.

Куда нужно обратиться, чтобы сдать анализ кала на обнаружение глистов?

Направить на обследование в лабораторию для выявления зараженности глистами может, в принципе, врач любой специальности. Взрослые, как правило, обращаются к терапевту, гастроэнтерологу или инфекционисту, в соответствии с жалобами. Ребенка направляет на исследование педиатр.

Анализ кала на яйца глистов – не единственное исследование, позволяющее выявить заражение. Но оно имеет место быть, с учетом высокой заболеваемости гельминтозами, и проводиться в строгом соответствии с правилами, а также с профилактической целью.

Видео